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染料法熒光定量PCR試劑盒所用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)解析

更新時(shí)間:2021-07-19 點(diǎn)擊量:5391
   染料法熒光定量PCR試劑盒通過對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定性及定量分析。目前它主要通過兩種方式一熒光染料或者熒光標(biāo)記的探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,并結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。
  染料法熒光定量PCR試劑盒采用的實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)是生命科學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù),是快速檢測(cè)基因表達(dá)水平的快捷方法,是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法,通過內(nèi)參或者外參法對(duì)待樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量的分析。高靈敏度、高重復(fù)性、高分辨率、動(dòng)力學(xué)范圍廣,儀器穩(wěn)定性有保障,數(shù)據(jù)能夠比較真實(shí)的反映出樣品中RNA的相對(duì)含量變化。
  染料法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn):
  1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
  2. 根據(jù)TB 基因的保守序列設(shè)計(jì)引物,引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性高。
  3. 采用了改良后的Taq Polymerase,具有高擴(kuò)增效率,高擴(kuò)增靈敏度,高擴(kuò)增特異性的特點(diǎn)。
  4. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
  熒光染料法:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量熒光染料,該染料只與雙鏈DNA小溝結(jié)合,并不與單鏈DNA鏈結(jié)合,而且在游離狀態(tài)不發(fā)出熒光,只有摻入DNA雙鏈中才可以發(fā)光,因此,在PCR體系中,隨著特異性PCR產(chǎn)物的指數(shù)擴(kuò)增,每個(gè)循環(huán)的延伸階段,染料摻入雙鏈DNA中,其熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。